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ELISA假阳性结果和细胞假阴性结果
点击次数:1914      发布时间:2016-08-21

假阳性结果和假阴性结果
1、标本的采集与保存
ELISA试剂盒当标本采集保存不当产生溶血时,红细胞中的血红蛋白释放到血清中,血红蛋白具有过氧化物酶的性质,其通过吸附或“PP效应"(蛋白质间相互吸附的现象)结合后,可催化A、B液显色而造成假阳性
标本采集保存不当致细菌污染,菌体中可能含有内源性HRP,会产生假阳性反应;标本在冰箱中保存时间过长导致血清IgG聚合,易使间接法的试验本底加深。因此,标本宜在新鲜时检测。
反复冻融血清会使抗体效价跌落,所以测抗体的血清标本如需保存做多次检测,宜少量分装冻存。
2、加样
ELISA试剂盒如果 样品稀释液少加或血清多加,都会引起本底增高。对于间接法来说,受上述两个因素影响更大。因为血清中受检的特异性IgG只有IgG中的一小部分。IgG的吸附性很强,非特异性IgG可直接吸附到固相载体上,有时也可吸附到包被抗原的表面。这些非特异性的IgG均可以和酶标二抗发生反应而造成较高阴性本底或假阳性。如果加入的血清过多,高于规定的稀释倍数,极易造成高值阴性。反之,造成假阴性。
如果加入的酶结合物过多或加在较高的孔壁上或孔口,也会引起本底升高或假阳性。
如果血液未开始凝固或凝固不完全时就强行离心分离血清,此时的血清中仍留部分纤维蛋白原,在ELISA测定过程中可以形成肉眼可见的纤维蛋白块,易造成假阳性结果。
3.  温育
由于ELISA试剂盒试验在一定温度下的反应时间并不是反应的终点,温育时间过短、温度过低,易致显色不全;温育时间过长、温度过高,易致非特异性结合紧附于反应孔周围,难以清洗彻底,产生阴性高值或假阳性反应。因此,要严格按规定的温度和温育时间进行。
由于水浴较难将温度控制在稳定的范围,因此大家每次试验时应认真观察水浴箱的温度,尽量少开启水浴箱门,严格控制水浴的温度为37±0.5。同时,微孔板不可重叠放置,以保证传热均匀,各板的温度都能迅速达到平衡。
由于试剂盒通常设定的反应温度为37度,在这个温度下温育一定时间,蒸发的水分会很多,对于整个反应体系来讲,各种反应物的浓度会不断地增加,这样必会导致反应zui后的值升高。因此温育时应贴上封板胶。

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